Окрашивание срезов

При изготовлении препаратов чаще всего бывает необходимо окрасить срезы, так как в неокрашенном препарате объект может быть виден только в том случае, если он обладает природной окраской или если, будучи бесцветным, он имеет различные коэффициенты преломления с той средой, в которую он заключен. Благодаря избирательному отношению многих красителей к различным структурам, неодинаковым по своим химическим свойствам, можно получить дифференцированную окраску объекта. Однако всякое одинаковое окрашивание различных структур не всегда указывает на общность их состава, так же как и различная окраска одной и той же краской различных структур еще не указывает на их различный химический состав.

Цель окраски состоит в выявлении интересующих исследователя структур.

Окрашивание представляет собой сложный физико-химический процесс. Нельзя понимать его только как простое отложение красителя на поверхности объекта. В ряде случаев при окрашивании краситель пропитывает объект.

В большинстве случаев красящие вещества бывают солеобразными соединениями, имеющими окрашенный ион (катион - основание или анион - кислотный радикал). В соответствии с этим и краски делятся на кислые (с окрашенным анионом) и основные (с окрашенным катионом). Существуют еще и нейтральные краски, образованные солеобразными соединениями кислой и основной краски. Индифферентными красками называются краски, не имеющие солеобразного строения.

Поглощение красителя окрашиваемым объектом может происходить только при наличии разницы в знаке заряда у красящего иона и у поглотителя. Объекты кислой природы окрашиваются основными красками, проявляя, таким образом, базофилию. Объекты, имеющие основной характер, окрашиваются кислыми красками (оксифилия).

Все красители по химическому составу представляют собой сложные органические соединения - производные бензола - с различными красящими группами (хромофорами).

Существуют различные объяснения процесса крашения и явлений окрашивания. Химическая теория объясняет этот процесс солеобразованием в результате взаимодействия между краской и субстратом. Согласно физико-химической теории процесс окрашивания сводится к действию физических или коллоидно-химических факторов как со стороны краски (величина молекулы, кристаллическое или коллоидное состояние, степень дисперсности, скорость диффузии), так и со стороны окрашиваемого объекта (величина межмицеллярных пространств, сил поверхностного натяжения и адсорбции). Электроколлоидальная теория считает, что эффект окраски зависит от реакции раствора красителя и от изоэлектрических точек (ИЭТ) окрашиваемых структур.

В зависимости от способа восприятия краски объектом различают субстантивные краски, которые могут окрашивать ткань непосредственно, и аджективные, окрашивающие только с предварительным протравливанием, без чего краска не воспринимается объектом. При этом образуется особый комплекс, называемый лаком, который отлагается на поверхности среза. К аджективным краскам относятся такие краски, как гематоксилин, кармин, называвшиеся ранее натуральными красками. Для протравы при крашении кислыми красками употребляются обыкновенно окислы трехвалентных металлов (алюминия, хрома). Для протравы при крашении основными красками применяется танин.

Протрава оказывает существенное влияние на свойства красителя. Цвет окрашенного объекта нередко зависит от протравы. Под влиянием протравы некрасящее вещество может приобретать способность окрашивать. Так, например, гематоксилин в чистом виде почти не обладает окрашивающей способностью. Лаки же его являются интенсивными красителями. Гематоксилин имеет кислый характер, а лаки его ведут себя как основные краски.

В зависимости от способа применения краски различают два метода окраски - прогрессивный и регрессивный. При первом окрашивание производится красителями слабой концентрации с проверкой степени окрашенности под микроскопом. Как только интересующие исследователя элементы объекта (среза) окрасятся в нужной степени, остальная краска удаляется из препарата. В случае регрессивной окраски препарат окрашивается с излишней интенсивностью (перекрашивается); после этого производится удаление избыточной краски растворителем (которым в некоторых случаях, в частности при гематоксилиновой окраске, является протрава) с проверкой степени окрашенности под микроскопом. Регрессивная окраска более удобна, так как снятие избытка краски идет медленнее, чем окрашивание, и под микроскопом легче установить нужную степень окраски.

Прогрессивный способ окрашивания чаще применяется к субстантивным краскам, регрессивный - к аджективным.

Имеется много различных красок, применяемых в различных комбинациях.