Опыт 10.3.Б. Изучение анатомии желудка, тонкого и толстого кишечника и анализ аминокислот, содержащихся в каждом отделе

Раствор Рингера для млекопитающих

Пробирки для образцов

Бинокулярный микроскоп

Набор анатомических инструментов

Дистиллированная вода

Пластинка для тонкослойной хроматографии

Проволочная петля

Хроматографический бачок с крышкой

н-Бутанол

Ледяная уксусная кислота

Вытяжной шкаф

Пульверизатор с нингидрином

Сушильный шкаф на 100°С

1. Используя крысу, препарированную в опыте 10.3,А, перевяжите и удалите по отдельности желудок, тонкий кишечник и толстый кишечник. Разрежьте их и смойте содержимое каждого участка в отдельные, помеченные пробирки, в которые предварительно налейте раствор Рингера для млекопитающих.

2. Сделайте тонкие срезы со стенок каждого из отделов и исследуйте их под бинокулярным микроскопом. Рассмотрите и опишите вид их внутренней поверхности.

3. Добавьте к содержимому пробирок небольшое количество дистиллированной воды, встряхните и оставьте на 15 мин отстаиваться.

4. Отберите из каждого образца каплю прозрачной надосадочной жидкости, нанесите на отдельную тонкослойную пластинку и подсушите. Повторите процедуру, чтобы нанести на хроматограмму достаточное количество образца. После того как пятна высохнут, поместите пластинки в хроматографический бачок, на дно которого налита слоем толщиной в 1 см смесь растворителей, состоящая из н-бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды в соотношении 40:10:15, и накройте бачок крышкой (рис. 10.33).

5. Оставьте пластинки в бачке на 90 мин, а затем выньте их, высушите в вытяжном шкафу и опрыскайте нингидрином.

6. Прогрейте пластинки в сушильном шкафу при 100°С.

7. Отметьте на пластинках пятна фиолетового и других цветов. Эти пятна указывают на присутствие в исследуемых образцах аминокислот. (Данное практическое занятие взято из Nuffield A-level Biology Maintenance of the organism.)

Рис. 10.33. Приготовление тонкослойной хроматограммы