Резка на микротоме

Толщина среза зависит от предъявляемых к препарату требований и от характера объекта. Молодые корешки для изучения содержимого клетки, строения и деления ядра следует резать толщиной 7-10 мк.

При нормальной резке нож должен быть поставлен перпендикулярно салазкам и направлению своего движения. Наиболее удобны плоско-вогнутые ножи с верхней вогнутой поверхностью. Нож не должен иметь зазубрин, он должен быть острым и чистым.

Правильно наточенный нож должен иметь прямой режущий край ("жало"). По сторонам жала нож должен быть сточен под более тупым углом, чем все лезвие бритвы, так чтобы вдоль жала образовались узкие фасетки (рис. 25).

Рис. 25. Лезвие микротомного ножа: А - микротомный нож в поперечном сечении: а - фасетка; б - лезвие; Б - наклон ножа к поверхности блока: а - жало ножа; б - угол, образуемый фасеткой с поверхностью блока; в - угол наклона ножа к поверхности блока; г - парафиновый блок

Для успешной резки существенное значение имеет угол наклона ножа к плоскости среза. Обычно его устанавливают так, чтобы плоскость фасетки почти прилегала к плоскости среза, образуя с ней ничтожный угол. При этом угол наклона всей плоскости ножа будет небольшим, но заметным. Нож закрепляется в нужном положении на салазках при помощи системы винтов и шарниров. Для установления угла наклона имеется соответствующая шкала.

После установки подставки с объектом, укрепления ножа на салазках (или неподвижном зажиме) и установки на нужную толщину среза можно приступить к резке. Резать надо быстро и плавно. При правильной резке последующий срез передним краем примыкает к заднему краю предыдущего, образуя ленту. При резке на ротационном микротоме правой рукой вращают колесо привода. При опускании держателя объекта (столика) с блока, надвигающегося на лезвие ножа, снимается срез. После этого держатель автоматически выдвигается вперед на расстояние, равное заданной толщине среза. Левая рука работающего поддерживает образующуюся парафиновую ленту, скользящую по неподвижному ножу. При резке на микротоме салазочного типа поочередно делают движения правой и левой рукой. Таким образом, за снятием среза следует подача блока на высоту, равную заданной толщине среза; эти поочередные движения приводят к образованию серии срезов - ленты, располагающейся на поверхности ножа и свисающей с него. Получающуюся ленту время от времени разделяют и укладывают в коробку с черным дном (так как на белом фоне прозрачный парафин трудно увидеть). В начале ленты кладут снятую с кубика этикетку. При получении ленты нужно следить, чтобы ни один срез из нее не потерялся, и если срезы не образуют сплошной ленты, их нужно собирать по отдельности и укладывать в нужной последовательности^*.

^* (Иногда ленту, снятую с микротомного ножа, не кладут в коробку, а кусочки ее, состоящие из одинакового числа срезов, помещают непосредственно на предметное стекло, одновременно с резкой осуществляя и наклеивание ленты.)

Ленту с ножа следует снимать мягкой кисточкой, ни в коем случае не иголками, не скальпелем, чтобы на ноже не оставалось царапин.

Для успешной резки важно, чтобы материал был хорошо пропитан парафином, тогда он не будет крошиться. Имеет значение также температура воздуха, при которой происходит резка. Обычно нормальная комнатная температура бывает низка для того, чтобы парафин легко резался и срезы легко слипались, образуя ленту. Поэтому следует подогревать блок перед резкой, а также нож и блок во время резки, используя тепло близко поставленной лампы, рефлектора и т. п.

Из различных сортов парафина следует предпочитать тот, который обладает более низкой температурой плавления, особенно в случае обычных, не отличающихся особой твердостью объектов.

Если в процессе резки к ножу прилипнет парафин, то это будет затруднять резку, так как к этому парафину лента будет прилипать и рваться. Поэтому следует время от времени вынимать нож из салазок, смывать с него парафин из капельницы ксилолом (бензолом, толуолом или бензином) и вытирать чистой мягкой тряпочкой. При этом надо держать нож так, чтобы не порезать рук (лучше всего обухом к себе, режущим краем от себя).

Для того чтобы резка на микротоме шла успешно, нужно время от времени смазывать все его рабочие части, в том числе и рельсы, керосином или машинным маслом, чтобы салазки с ножом двигались без всякого напряжения.

Первым этапом при изготовлении микротомного препарата является наклеивание парафиновой ленты на предметные стекла.