Приготовление красителя и протравы

Гематоксилин Гейденгайна приготовляется различно. Наилучшим является такой способ: 1 г сухого гематоксилина растворяют в 10 мл 96%-ного спирта и ставят в колбе с ватной пробкой или бумажной крышкой на свет на 2-3 недели для созревания. Раствор постепенно вместо тускло-оранжевой окраски приобретает яркую кирпично-красную. После этого его разбавляют дистиллированной водой до 100 мл и оставляют до употребления, непосредственно перед которым добавляют еще 100 мл воды. Можно сразу после растворения в спирте добавить воды до 100 мл и в таком виде оставить для созревания.

Если раствор гематоксилина, пригодный для окраски, нужно получить скорее, то его приготовляют несколько иначе: 1 г гематоксилина растворяют в 100 мл воды при нагревании на водяной бане в течение 30-60 мин. В результате этого жидкость из светлой превратится в ярко-красную. По остывании ее фильтруют и добавляют еще 100 мл воды. Таким образом, для окраски употребляется 0,5%-ный раствор гематоксилина. Иногда в готовый гематоксилин кладут кристаллик тимола во избежание его порчи под действием микроорганизмов. Готовый гематоксилин может долго храниться.

Для поддержания пригодности для окраски бывшего в употреблении гематоксилина его надо чаще фильтровать ради обогащения кислородом, что улучшает его красящие свойства. Проверить годность гематоксилина для окрашивания можно путем приливания нескольких капель этой краски в небольшое количество водопроводной воды. Если вода приобретет оранжевокрасную, вишневую или красно-фиолетовую окраску, то раствор можно считать хорошим. Если же вместо этого в воде образуется черная муть, то, значит, гематоксилин необратимо испортился.

При приготовлении квасцов рекомендуется сделать предварительно более крепкий (16%-ный) раствор, который перед употреблением следует разбавить до нужной для протравливания и дифференцировки концентрации, так как более слабые концентрации быстро разлагаются (их хватает на 3-4 проводки). Кристаллы квасцов, пригодные для употребления, имеют аметистово-фиолетовую окраску. Нередко среди них встречаются пожелтевшие, выветрившиеся кристаллы или же на фиолетовых кристаллах имеются желтый налет и желтые включения. Перед приготовлением раствора квасцов необходимо очистить их от разложившихся кристаллов и участков в кристаллах.

Всякая окраска микротомных препаратов, сделанных из парафинированного материала, начинается с освобождения срезов от парафина и помещения в среду, одинаковую с растворителем краски, - чаще всего в спирт или воду. Как было сказано выше, гематоксилин Гейденгайна представляет собой водный раствор краски, протрава также представляет собой водный раствор железоаммиачных квасцов. Удаление парафина производят погружением препаратов в его растворитель - ксилол, бензол, толуол или хлороформ. Затем препараты переносят в спирт. Подробное описание проводки препаратов, сделанных из парафинированного материала, до воды указано на странице 66.

Из воды препараты помещают в 4%-ный водный раствор железоаммиачных квасцов. Для ускорения протравливания можно поместить раствор квасцов с погруженными в него препаратами в термостат при 50-60° С и в этом случае держать препараты в квасцах всего 40-60 мин. После этого тщательно, чтобы не испортился гематоксилин, отмывают препараты от квасцов в 3-4 сменах дистиллированной воды (по нескольку минут) и помещают их на 12-20 ч в гематоксилин. Для ускорения окрашивания можно поместить раствор гематоксилина с препаратами в термостат при 50-60° С на 40-60 мин.

В результате препараты избыточно окрашиваются и срезы имеют вид сплошных темных пятен.