Дифференцировка срезов

Чтобы выявить на окрашенных срезах интересующие нас структуры, препараты подвергают постепенному обесцвечиванию ("раскрашиванию") в 2%-ных железоаммиачных квасцах. Из гематоксилина препараты переносят в проточную воду, затем в дистиллированную и наконец в квасцы.

Так как удаление излишней краски из различных структур идет с различной быстротой, этот процесс надо регулировать под микроскопом (обычно дифференцировку ведут при увеличении 8 X 40 или 10 X 40). Для этого препараты через небольшие промежутки времени вынимают из дифференцирующей жидкости и помещают на столик микроскопа, вытерев нижнюю сторону препарата или поместив его в чашку Петри (пустую или с водой). Очень удобно и самую дифференцировку производить в чашке Петри, которую с погруженным в квасцы препаратом можно непосредственно поместить под микроскоп.

Если нужно получить хорошо окрашенную цитоплазму, то препараты надо дифференцировать очень мало, и ядро в этом случае будет иметь вид сплошного темного пятна. Дифференцировка ядра, для изучения которого обычно применяется описываемая окраска, длится дольше, в результате чего цитоплазма совсем обесцвечивается. В первую очередь начинает обесцвечиваться кариолимфа и затем уже проступают структуры покоящегося или делящегося ядра.

В зависимости от тех требований, которые предъявляются к препарату, дифференцировать его надо больше или меньше. Например, хромосомы могут оставаться более темными, если требуется лишь их подсчитать, для изучения их морфологии препарат надо обесцветить несколько сильнее. Для получения хороших эмбриологических препаратов надо вести дифференцировку примерно же так, как и для цитологических, но с последующей подкраской для выявления цитоплазмы и границ клеток. Существует указание, что прекращать дифференцировку надо тогда, когда начнут обесцвечиваться ядрышки.

Тон окраски препарата после дифференцировки зависит от качества гематоксилина и квасцов и времени пребывания в том и другом реактиве. Иногда плазма сохраняет синеватую окраску, а хромосомы имеют темно-синий цвет. В других случаях плазма совершенно обесцвечивается, хромосомы же выглядят черными.

По окончании дифференцировки препараты помещают для промывки в проточную воду на 30-60 мин.

Оборудование. Банки с притертыми пробками; капельницы; стаканы; кристаллизатор; чашки Петри.

Реактивы. Гематоксилин; железоаммиачные квасцы; ксилол; 96%-ный спирт.