Некоторые методы ускоренного приготовления цитологических препаратов

Помимо изготовления препаратов из срезов, существует ряд так называемых ускоренных методов получения временных, а иногда и постоянных препаратов. К ним прежде всего относится уксусно-карминовый метод. Он применяется главным образом для изучения процессов формирования и развития пыльцы в пыльниках и анализа хромосом в кончиках корешков на живом или фиксированном материале. Для этого приготовляют насыщенный раствор кармина в 45%-ной уксусной кислоте (приблизительно 0,5-2 г в 100 мл) при кипячении в течение 20-30 мин. После охлаждения его фильтруют; нередко для усиления действия к нему добавляют 1-2 капли уксуснокислого железа.

Особенность воздействия такой смеси на объект состоит в том, что она одновременно производит фиксацию и окраску. Фиксация осуществляется уксусной кислотой, окраска - кармином, окрашивающим ядра и хромосомы в темно-красный цвет.

Для приготовления препарата пыльник помещают на предметное стекло в каплю уксуснокислого кармина и раздавливают покровным стеклом или концом стеклянной палочки. При этом содержимое пыльника (материнские клетки пыльцы, тетрады, микроспоры, пылинки) выдавливается из полости пыльника. Обрывки стенки пыльника удаляют и накрывают каплю чистым покровным стеклом. В некоторых случаях препарат оказывается достаточно четким после выдерживания его в течение нескольких часов (до суток) для лучшего прокрашивания. Чаще приходится подвергать препарат нагреванию до кипения уксуснокислого кармина в течение нескольких минут. Подобным же образом изготовляют давленые препараты (мазки) из кончиков корешков. Но в этом случае обычно применяют предварительную фиксацию их.

Для хранения уксусно-карминовых препаратов в течение некоторого времени к раствору кармина под покровное стекло добавляют глицерин или же обмазывают края препарата парафином или специальной замазкой.

К ускоренным способам получения окрашенных препаратов относится уксусно-орсеиновый метод. В отличие от уксусно-карминовых препаратов, где цитоплазма часто удерживает краску, уксусно-орсеиновые препараты окрашиваются более дифференцированно-цитоплазма почти не окрашивается.

Раствор приготовляют следующим образом: 1 г орсеина растворяют в 45 мл горячей ледяной уксусной кислоты, раствор остужают, прибавляют 55 мл дистиллированной воды, взбалтывают и профильтровывают.

Размягчению тканей и лучшему прокрашиванию способствует добавление к раствору орсеина 1 н. соляной кислоты (1 мл кислоты на 10 мл раствора).

Процедура окрашивания тождественна с применяемой при уксусно-карминовой покраске.

К методикам получения цитоэмбриологических препаратов без приготовления срезов относится также проращивание пыльцы на искусственных средах, которое применяется для изучения образования и поведения спермиев в пыльцевой трубке.

Для проращивания пыльцы подогретый 1-2%-ный раствор агар-агара или желатины, с добавлением 5-20%-ной сахарозы, разливают тонким слоем на абсолютно чистые предметные стекла (избыток сливают со стекла). После остывания среды на нее рассеивают небольшое количество пыльцы, затем стекла помещают во влажную камеру (например, в чашки Петри, устланные смоченной фильтровальной бумагой) при комнатной температуре. После прорастания пыльцы препараты целиком погружают в фиксирующую жидкость (например, в жидкость Навашина или Карнуа), промывают, окрашивают железным гематоксилином, по Фельгену (стр. 63, 120) или другим способом, обезвоживают и заключают в канадский бальзам.

Оборудование. Чашки Петри; покровные и предметные стекла; колбы; склянки с пробками.

Реактивы. Кармин; орсеин; уксусная кислота; уксуснокислое железо; агар-агар (или желатина); сахароза; реактивы для фиксации.

Клинические Исследования препаратов и их результаты - на сайте для медиков Medznat