Заключение срезов в среду, обеспечивающую длительное хранение препаратов

После окраски, дифференцировки и промывки в воде срезы нужно заклеить в канадский бальзам. Он обладает полной прозрачностью, высокой твердостью и показателем преломления (1,535), близким к показателю преломления стекла. Растворителем бальзама является ксилол, поэтому для заключения препарата в канадский бальзам его надо провести через спирты (96%-ный и 100%-ный для полного обезвоживания) и ксилол (можно бензол или толуол). Чтобы в срезах не оставалось ни малейших следов спирта, в присутствии которого бальзам может помутнеть, после спиртов перед ксилолом препарат погружают в смесь абсолютного спирта с ксилолом.

Таким образом, для окраски и заключения в бальзам микроскопического препарата его нужно провести от парафина до воды и после окрашивания - от воды до канадского бальзама через батарею промежуточных веществ, подобно тому как это делалось с фиксированным материалом. Для проводки употребляют специальные цилиндры высотой 10-12 см и диаметром 4-5 см, или кюветы той же высоты с размером дна примерно 3 X 8 см, или же обыкновенные (той же величины) широкогорлые банки с хорошо пригнанными крышками или пробками^*. Препараты берут пинцетом с широкими концами и устанавливают в этих сосудах вертикально; при этом стекла складывают попарно, нижними (тыльными) сторонами внутрь, верхними (лицевыми) со срезами - наружу. Между каждой парой стекол прокладывают кусочки спички (или специальный стеклянный "хомутик"), чтобы избежать соприкосновения верхних сторон препаратов и сдирания срезов (рис. 27).

^* (Для этой цели можно использовать также банки из-под майонеза или чайные стаканы, подобрав к ним плотно закрывающие крышки.)

В сосуды указанных размеров можно установить 5-10 пар препаратов. При этом надо следить, чтобы при погружении препаратов жидкость в сосудах не поднималась выше верхнего края стекла. В противном случае всплывут все спички, разделяющие пары препаратов, и срезы могут оказаться поврежденными. Лучше всего загружать препараты партиями, содержащими примерно одинаковое количество препаратов. При этом уровень жидкости в сосуде не должен превышать низа или середины матированного края стекла. Матированный край (если он один) должен быть всегда наверху. Благодаря этому в случае надобности бывает легче рассмотреть номер препарата, а также определить его верхнюю (лицевую) сторону, царапая иголкой по матированной поверхности. Чтобы препараты не скользили по дну цилиндра или банки и не падали, на дно этого сосуда следует постелить вырезанный по форме дна кусок фильтровальной бумаги.

Рис. 27. Цилиндр с препаратами

При помещении препаратов в воду (которую удобнее всего наливать в химические или чайные стаканы) их лучше не складывать попарно, а ставить, прислоняя к стенкам верхней стороной (со срезами) и обращая нижнюю (тыльную) сторону внутрь стакана. Расположение в стакане небольшого количества препаратов в один ряд создает лучшие условия для промывания. Увеличение числа стаканов позволяет без потери времени проводить эту операцию. При промывании проточной водой под краном в течение длительного времени такая расстановка препаратов является необходимой и единственно удобной. В случае большого количества препаратов вместо стаканов можно использовать широкие кристаллизаторы.

При перенесении препаратов из одной среды в другую, во избежание заноса следов предыдущей жидкости в последующую, они смываются из капельниц реактивом, аналогичным сначала предшествующей, затем - последующей жидкости. При перенесении препаратов из смеси 100%-ного спирта с ксилолом их смывают только спиртом, так как смесь скатывается со стекла. По той же причине при перемещении препаратов из смеси спирта с ксилолом в чистый ксилол их не смывают; смывание же препаратов производится перед заключением в бальзам. Смывание водой при перенесении препаратов в водный раствор или из водного раствора (квасцов или краски) целесообразнее делать не из капельниц, а погружая препараты в сосуды (стаканы) с водой, лучше в несколько смен.

При смывании препараты, сложенные попарно, разъединяют (раздвигают), их нижнюю сторону вытирают сухой чистой тряпочкой, так же как и края стекла, свободные от срезов. Это предохраняет от занесения остатков одной жидкости в другую. Надо вытирать тыльную сторону препаратов также и в тех случаях, когда они переносятся и без смывания из капельниц.

Таким образом, проводка препаратов от парафина до канадского бальзама осуществляется следующим образом.

1) Препараты помещают в цилиндр с растворителем парафина - ксилолом, бензолом или толуолом^* на 30 мин. Затем, держа препараты пинцетом над цилиндром с ксилолом, смывают остатки парафина с каждого препарата, поливая его ксилолом из капельницы. После этого препараты ополаскивают из капельницы с 96%-ным спиртом (не над цилиндром).

^* (В случае низкой температуры в помещении или слабой растворимости данного сорта парафина препараты с парафиновыми срезами для полного его удаления приходится держать в ксилоле несколько дольше указанного времени или, что лучше, поместить сосуд с ксилолом и стоящими в нем препаратами на короткое время (15-20 мин) в термостат при 56°С (при условии плотного закупоривания сосуда). Если препарат не вполне свободен от парафина, то при дальнейшей проводке вода будет скатываться со стекла, как с жирного. В этом случае препарат надо в обратном порядке довести до ксилола и тщательно удалить остатки парафина.)

2) Препараты помещают в цилиндр с 96%-ным спиртом для вытеснения остатков ксилола на 15 мин. Затем ополаскивают препараты над этим цилиндром 96%-ным спиртом из капельницы и промывают в 3 сменах дистиллированной воды по 3-6 мин.

3) Препараты погружают в цилиндр с 4%-ными железоаммиачными квасцами для протравы на 4 ч (или в термостат при 50-60°С на 40-60 мин)^*. Затем препараты промывают в 3 стаканах дистиллированной воды по 3-5 мин в каждом.

^* (Если распределение рабочего времени не позволит дождаться конца пребывания препаратов в квасцах, то их можно оставить в этом реактиве на ночь (т. е. примерно на 12 ч).)

4) Препараты переносят в цилиндр с гематоксилином на 8-20 ч (или на 40-60 мин в термостат при 50-60° С)^*. Затем их промывают в стакане с водопроводной водой в течение 5 мин и в 2 стаканах дистиллированной воды по 2-3 мин в каждом.

^* (Практически препараты лучше всего оставлять в гематоксилине на ночь.)

5) Препараты переносят в цилиндр или чашки Петри с 2%-ными квасцами для дифференцирования (время пребывания контролируется под микроскопом). Затем их промывают в 2 стаканах с дистиллированной водой по 2-3 мин в каждом. После этого препараты помещают в стаканы или кристаллизаторы с проточной водопроводной водой, поставленные под струю на 1 ч, и переносят их в стакан с дистиллированной водой для ополаскивания.

6) Препараты помещают в цилиндр с 0,5-1%-ным водным раствором краски для подкрашивания (светлый зеленый, эозин, оранж) на 1-10 мин^*. Затем в 3 стаканах с водой отмывают лишнюю краску. Если раствор краски не водный, а спиртовой, то смывание краски производится 96%-ным спиртом из капельницы (не над цилиндром).

^* (Степень окрашиваемости определяет срок пребывания в красителе, ее можно проверить под микроскопом.)

7) Препараты переносят в цилиндр с 96%-ным спиртом на 15 мин^*. После этого их споласкивают из капельниц 96%-ным, а затем 100%-ным спиртом, держа препараты над цилиндром с 96%-ным спиртом.

^* (Имеется в виду не тот цилиндр со спиртом, о котором речь идет в пункте 2, а специально предназначенный для данной процедуры.)

8) Препараты помещают в цилиндр со 100%-ным спиртом на 15 мин. Смывают препараты из капельниц 100%-ным спиртом, держа их над цилиндром.

9) Препараты переносят в цилиндр со смесью 100%-ного спирта и ксилола (1:1) на 15 мин.

10) Препараты переносят в цилиндр с чистым ксилолом на 15-20 мин (можно дольше). Споласкивают их чистым ксилолом из капельницы (над цилиндром с ксилолом).

11) Срезы заключают в канадский бальзам следующим образом. Препарат вынимают из цилиндра с ксилолом, смывают чистым ксилолом из капельницы, вытирают его с нижней стороны тряпочкой и кладут на белую бумагу (чтобы были видны срезы). Затем на препарат, посередине участка со срезами, или несколько левее, наносят стеклянной палочкой каплю бальзама и из капельницы 1-2 капли ксилола. С левой стороны от срезов ставят покровное стекло наклонно на ребро левой рукой; держа в правой руке препаровальную иглу, осторожно придерживают стекло ее кончиком и постепенно опускают его на каплю бальзама, которая расходится равномерно между покровным и предметным стеклами. Постепенное покрывание стеклом объекта избавляет от попадания под стекло воздуха. После этого полосками фильтровальной бумаги удаляют с препарата избыток ксилола и бальзама. Через несколько дней после заключения препарата в бальзам его можно исследовать под микроскопом.

Покровные стекла должны быть прямыми, неискривленными, иметь размеры, соответствующие площади предметного стекла, занятой срезами. Толщина покровного стекла должна быть не более 0,18 мм. Это условие объясняется тем, что при работе с объективами, применяемыми с масляной иммерсией, свободное расстояние между фронтальной линзой и рассматриваемым объектом бывает так мало, что при более толстом (чем 0,18 мм) стекле не бывает возможности фокусировать объект. Измерение стекол (для выбраковки стекол толще 0,18 мм) производится микрометром. Употребляемые для заклеивания препаратов стекла должны быть абсолютно чистыми, для чего их протирают спиртом или смесью спирта с ксилолом, а затем вытирают чистой сухой тряпочкой. Если стекла были сильно загрязнены, то их можно промыть теплой мыльной водой и даже выдержать в хромпике.

Для проводки препаратов необходимо иметь следующее:

Оборудование. Цилиндры (банки) с притертыми пробками - 8 штук; стаканы; капельницы; бальзамница; микрометр; пинцет; покровные стекла; препаровальные иглы; фильтровальная бумага.

Реактивы для проводки препаратов от парафина до канадского бальзама^*. 96%-ный спирт - 925 мл (считая, что для приготовления 100%-ного спирта нужно двойное количество 96%-ного), т. е. около 1 л; ксилол - 475 мл, т. е. около 0,5 л; канадский бальзам, растворенный в ксилоле до жидкой консистенции; железоаммиачные квасцы и гематоксилин.

^* (Количество реактивов для составления одной батареи цилиндров несколько меняется в зависимости от емкости цилиндров или банок и количества препаратов, проводимых одновременно. Ориентировочно можно считать, что при свободном размещении 20 препаратов в сосуде диаметром 6 см нужно налить в него примерно 150 мл жидкости; для смывания из капельниц 20 препаратов потребуется 50 мл жидкости в каждом случае.)

Вожделеете узнать, где можно узнать трогательные контакты аппетитных проституток? Всегда лучшие индивидуалки способны завлечь вас своими любимыми телами, звоните им в любое время дня и ночи.