Общие сведения о методе

Гистохимический метод позволяет открывать вещества, локализованные в клетках и тканях и содержащиеся в микроскопически малых дозах. В настоящее время разработан комплекс гистохимических реакций - окрашивания, обесцвечивания, восстановления бесцветной формы до окрашенной и обратно и осаждения. Многие реакции, проводимые на растительных объектах, заимствованы из зоологической гистохимии; это вполне естественно и оправданно, так как существует общность биологических процессов и закономерностей в растительном и животном мире.

Непременном условием гистохимического метода является специфичность реакции. Надо иметь уверенность, что данная реакция протекает только при наличии данного соединения и не вызывается какими-либо другими веществами. Если же такие вещества имеются, то их надо удалить.

При проведении реакции надо помнить, что малое количество открываемых веществ требует минимального количества реактивов и обусловливает необходимость большой чистоты в работе.

Нужно следить, чтобы к каждому реактиву была своя пипетка, чтобы стекла - предметные и покровные - были абсолютно чистые, чтобы фильтровальная бумага не употреблялась для отсасывания по нескольку раз.

При изготовлении препаратов не надо делать слишком тонких срезов, необходимо, чтобы оставались один-два слоя ненарушенных клеток с нетронутым содержимым.

При работе с гистохимическими реактивами надо иметь в виду, что многие из них являются нестойкими, требуют хранения в специальных условиях и частого возобновления.

Гистохимический метод имеет ряд достоинств и преимуществ перед биохимическим. Это - сохранность целостности структуры объекта, возможность установления локализации веществ или процессов обмена, возможность обнаружения ряда веществ на живом материале, простота проведения реакций. При применении биохимических методов обнаружения веществ структура клеток, как правило, нарушается.

В то же время гистохимический метод имеет ряд недостатков. Например, до настоящего времени не существует достаточного количества реакций для выяснения различных процессов; многие реакции не являются вполне специфичными; имеется опасность диффузии продуктов реакции из клетки в клетку и образования артефактов. Малая изученность степени проницаемости клеточных оболочек для того или иного реактива мешает правильному суждению о характере течения реакции.

Наиболее серьезным недостатком гистохимического метода на сегодняшний день является недостаточная разработанность и распространенность количественных методов. В большинстве описываемых ниже реакций количественная оценка производится лишь визуально.

Гистохимические реакции подобраны для различных групп веществ. Обычно выделяют реакции на углеводы, жиры, аминокислоты и белки, ферменты, витамины, ростовые вещества, вещества вторичного происхождения (запаса и отброса).