Приемы работы

Подбор материала

Наличие того или иного вещества, его активность, а следовательно, степень выявления его той или иной реакцией неодинаковы в различных клетках, тканях, органах растений и зависят от их функции, возраста, местоположения и т. д. Поэтому при подборе материала для осуществления предлагаемого набора гистохимических реакций можно было бы взять для каждой реакции тот объект, который наиболее резко отзывается на проводимую реакцию.

Однако такой подбор материала внес бы слишком большое морфологическое разнообразие, отвлекающее внимание от существа дела. Кроме того, не было бы возможности сравнить распределение различных веществ в одинаковых образцах и представить себе общую картину жизнедеятельности данного органа.

Исходя из этих соображений, мы взяли за основу три объекта для проведения на них всех реакций, а именно: лист капусты, зерновку кукурузы и кончик корешка лука.

Клетки и ткани этих объектов очень разнообразны по возрасту, функциям, физиологическому состоянию и морфологии. Кроме того, эти объекты хороши тем, что они могут быть найдены в любых условиях и в любое время года.

При знакомстве с проводимой реакцией на листе капусты или в кончике корешка лука надо рассмотреть препарат под микроскопом сначала при малом увеличении (7 X 8), чтобы увидеть поведение различных тканей. При большом увеличении (7 X 40) следует проследить характер реакции в отдельных клетках. При изучении реакции на срезах с зерновки кукурузы общую картину следует наблюдать под лупой (X 10 или X 20) и детали под микроскопом (7 X 8 и 7 X 40).

Клетки и ткани листа капусты различны по уровню жизненной активности и выполняемым функциям, что делает его удобным объектом для проведения на нем гистохимических реакций.

Для получения единообразного материала при проведении реакций надо, чтобы лист, используемый для проведения реакций, был всегда одного и того же порядка, равно как и жилка. Мы брали, как правило, 25-30-й лист, считая от центра и принимая за первый самый маленький, хорошо различимый зародышевый лист около одного миллиметра в диаметре. Для изготовления гистохимических препаратов использовались поперечные срезы жилки второго порядка, сделанные в ее средней трети.

Лист капусты (табл. 1) построен из крупных паренхимных клеток изодиаметрической формы, разделенных довольно значительными межклетниками и заполненных цитоплазмой. Клетки субэпидермальных слоев, так же как и клетки эпидермиса, несколько мельче. Типичной хлоренхимы в листе капусты нет.

Таблица 1. Реакция Троммера на сахара. Лист капусты. 1 - эпидермис; 2 - паренхима листа; 3 - колленхима пучка; 4 - ксилема; 5 - камбий; 6 - флоэма (увеличение 7 X 8)

Проводящие пучки располагаются группами от одного до пяти. В главной жилке число пучков больше и они, естественно, крупнее. Пучки разделены тяжами мелкоклеточной паренхимы.

Каждый пучок состоит из ксилемы, флоэмы и расположенных между ними нескольких слоев камбия. Со стороны ксилемы и со стороны флоэмы к нему примыкают участки колленхимы, которые иногда вклиниваются и между пучками. Клетки колленхимы имеют неправильную форму и также содержат цитоплазму и ядро.

Строение зерновки кукурузы (табл. 8) обычно изучают на продольном дорзовентральном, проходящем через плоскость симметрии срезе. На таком срезе видны все части зародыша.

Многие биохимические процессы, связанные с появлением ряда веществ, выявляющихся различными гистохимическими реакциями, не идут в сухой, покоящейся зерновке и начинают осуществляться в намоченной зерновке. Намоченная зерновка к тому же является и более удобным материалом для получения хороших срезов. Поэтому надо иметь зерновки, замоченные примерно за сутки до их использования.

Зерновка кукурузы представляет собой семя с почти нацело разрушенной семенной оболочкой, окруженное плодовой оболочкой, или перикарпием. Семя состоит из зародыша и эндосперма. Зародыш очень сильно дифференцирован, и в нем уже сформированы все части молодого растения, построенные из живых меристематических тканей. Зародыш имеет такое строение: корешок, кончик которого окружен колеоризой и прикрыт чехликом, переходит в подсемядольное колено (гипокотиль). На верхушке подсемядольного колена находится почечка, сложенная из нескольких листочков и одетая первым листом, своеобразно устроенным и носящим название колеоптиле. От подсемядольного колена отходит единственная семядоля (щиток), которая примыкает к эндосперму и своими краями охватывает корешок и почечку. Семядоля сильно развита и несет со стороны эндосперма так называемый эпителиальный (всасывающий) слой. Эндосперм состоит из мощной крахмалистой ткани с очень слабым жизненным потенциалом и окружающего его алейронового слоя - живой активной ткани.

Таким образом, и в зерновке кукурузы мы имеем большое разнообразие клеток и тканей по их топографии, морфологии, назначению и т. д.

Помимо двух описанных объектов, рекомендуемых для проведения всех реакций, в каждом отдельном случае могут быть использованы дополнительно и другие, содержащие ткани и клетки, особенно сильно отзывающиеся на ту или иную реакцию. Если реакции касаются тонких клеточных и ядерных структур, рассмотреть которые на срезах, сделанных от руки, является затруднительным, то приходится прибегать к изготовлению давленых или микротомных препаратов (стр. 43). Чаще всего отдельные структуры клетки наблюдают в меристеме кончиков молодых корешков. Строение кончика корешка лука описано выше (стр. 14).