|
Биуретовая реакцияБиуретовая реакция служит для обнаружения пептидных связей. Пептидная связь наиболее характерна для белков, и в этом смысле биуретовая реакция являемся наиболее специфичной. В белках возможны и другие связи, например, сульфидная, эфирная, солевая, водородная. Для обнаружения этих связей биуретовая реакция негодна. Биуретовая реакция основана на том, что в щелочной среде (в присутствии гидроокиси натрия) при добавлении солей меди (медного купороса) полипептиды и белки образуют окрашенные комплексные соединения с ионом меди. Реакция осуществляется при наличии не менее двух пептидных связей. Дипептиды не реагируют. Полипептиды и низкомолекулярные белки дают розоватую и красноватую окраску, остальные белки - фиолетовую. Свое название биуретовая реакция получила от производного мочевины - биурета, который дает эту реакцию. Хотя отдельные аминокислоты этой реакции не дают, но, как исключение, она возникает в присутствии аспарагина и гистидина. Отрицательной чертой биуретовой реакции является то, что она малочувствительна. Окрашивание особенно хорошо проявляется только там, где белков много (например, в меристематических клетках). Проведение биуретовой реакции на свежем материале может дать ослабленное окрашивание из-за слабой проницаемости тканей. Фиксированный материал дает в этом отношении лучшие результаты; однако надо иметь в виду, что фиксация спиртом неприемлема для спирторастворимых белков (как, например, белки зерновых злаков). Реактивы 1) 7%-ный раствор медного купороса. 2) 30-50%-ный раствор гидроокиси натрия (или калия). Проведение реакции 1. Погрузить срез в раствор медного купороса на 5-30 мин в часовом стекле. 2. Тщательно отсосать этот раствор фильтровальной бумагой и промыть срез водой до удаления голубой окраски из промывной воды. 3. Перенести срез на предметное стекло и обработать раствором гидроокиси натрия (или калия) от 10-20 мин до 1 ч. 4. Наблюдать появление фиолетовой окраски (иногда розовой в присутствии низкомолекулярных белков или полипептидов). Результаты реакции (табл. 17) Таблица 17. Биуретовая реакция. Зерновка кукурузы. А - общий вид зерновки кукурузы в разрезе; Б - детали строения зерновки кукурузы; 1 - зародышевый корешок; 2 - щиток; 3 - всасывающий эпителий; 4 - алейроновый слой и прилегающие клетки эндосперма; 5 - алейроновый слой в нижней части зерновки; 6 - эндосперм около средней части щитка; 7 - эндосперм из центральной части зерновки; 8 - колеоптиле; 9 - точка роста почечки; 10 - проводящие пучки; 11 - колеориза (увеличение 7 X 8 и 7 X 40) Реакция не идет в паренхиме листа капусты и проявляется неярко в тканях пучка. Эндосперм зерновки кукурузы не дает реакции, не считая алейронового слоя, где она проявляется, хотя и очень незначительно. Зародыш окрашивается ярко. дешевые проститутки | www.minetki.org |
|
|
© BIOLOGYLIB.RU, 2001-2020
При копировании ссылка обязательна: http://biologylib.ru/ 'Библиотека по биологии' |