Реакция на белки по Мэзиа [1969 Паламарчук И.А., Веселова Т.Д.

При проведении этой реакции используется краситель ртутный бромфеноловый синий, который является индикатором.

Раствор бромфенолового синего в сулеме соединяется с белком в определенных количественных отношениях в зависимости от количества белка. Выяснено, что 1 молекула краски связывается с 10 остатками аминокислот. Количественные показатели (связанная краска) могут быть измерены фотометрически.

С бромфеноловым синим реагируют все белки. Основные белки связывают краску при отсутствии ртути; другие белки связывают краску через ртуть. Большинство свободных аминокислот тоже усваивает эту краску, но они не дают прочных соединений и вымываются при промывке.

Настоящая реакция позволяет обнаружить протеины и в структурах, содержащих нуклеиновые кислоты. Их можно удалить 5%-ной трихлоруксусной кислотой, воздействуя ею в течение 15 мин при 90°С.

Удаление нуклеиновых кислот может усилить окраску, что, вероятно, связано с тем, что они могли блокировать группы, связывающие, краски. Хромосомы также красятся после удаления нуклеиновых кислот ярче.

Окраска бромфеноловым синйм может проводиться как на живом, так и на фиксированном материале^*, при этом годны как спиртовые, так и водные фиксаторы, за исключением осмиевых.

^* (Для получения постоянных препаратов из фиксированного материала изготовляют парафиновую ленту и наклеивают ее на предметное стекло. Полученные таким путем препараты освобождают от парафина и обычным путем доводят до воды (стр. 65). Такие же процедуры следует проводить во время изготовления постоянных препаратов при проведении реакций на основные белки, нуклеиновые кислоты и фосфатазы.)

1) Краситель (раствор бромфеналового синего в сулеме).

Приготовление красителя. 10 г сулемы и 100 мг бромфенолового синего растворить в 100 мл воды.

Приготовление фосфатного буфера. Приготовить исходные - 1/15 М растворы Na₂HPO₄•2H₂O и KH₂РO₄, растворив 11,876 г Na₂HPO₄•2H₂O в 1 л дистиллированной воды и 9,078 г KH₂PO₄ тоже в 1 л дистиллированной воды. Полученные растворы слить в отношении 6:4.

6) Смеси ацетона с ксилолом в отношении 9:1, 5:5, 1:9.

2. Перенести их в 0,5%-ную уксусную кислоту на 20 мин (для удаления избытка красителя, не связанного с белком).

4. Поместить их в фосфатный буфер с pH=6,98 на несколько секунд, чтобы перевести краситель в синюю форму.

5. Быстро обсушить препараты фильтровальной бумагой.

6. Быстро обмыть препараты из капельниц ацетоном, ацетон-ксилолом (9:1), ацетон-ксилолом (5:5), ацетон-ксилолом (1:9) и ксилолом.

9. Наблюдать синее окрашивание структур, содержащих белок.

Таблица 18. Реакция на белки по Мэзиа. Кончик корешка лука. А - общий вид кончика корешка лука в разрезе; Б - детали строения кончика корешка лука; 1 - корневой чехлик; 2 - зона деления; 3 - зона растяжения (увеличение 7 X 8 и 7 X 40)

В кончике корешка лука цитоплазма и ядра клеток окрашиваются в густой голубой цвет, особенно ярко окрашиваются ядрышки. Клетки зон растяжения и всасывания и особенно наружные клетки чехлика окрашиваются слабее, будучи более вакуолизированными.

Для проведения реакции на основные белки употребляется материал, который фиксировался в 10%-ном формалине в течение 3-6 ч, с последующей промывкой в проточной воде в течение 10-12 ч и заливкой в парафин^*.

2) 0,1%-ный раствор прочного зеленого (раствор должен иметь pH=8, что достигается добавлением минимально необходимого количества гидроокиси натрия).

4) 96%-ный, 100%-ный спирт, ксилол и смеси спирта с ксилолом (стр. 69).

1. Перенести препараты из воды в 5%-ную трихлоруксусную кислоту, находящуюся на кипящей водяной бане, на 15 мин для извлечения нуклеиновых кислот.

2. Промыть их в трех порциях 70%-ного спирта (по 10 мин в каждой).

3. Промыть препараты дистиллированной водой.

4. Окрашивать препараты 0,1%-ным водным раствором прочного зеленого в течение 30 мин при 22° С.

5. Промывать их в дистиллированной воде в течение 5 мин.

6. Обезводить препараты в 96%-ном спирте и заключить в канадский бальзам (стр. 66).

7. Наблюдать окрашивание основных белков в изумруднозеленый цвет благодаря наличию в них аргинина и лизина.

Таблица 19. Реакция на основные белки. Кончик корешка лука. А - общий вид кончика корешка лука в разрезе; Б - детали строения кончика корешка лука; 1 - корневой чехлик; 2 - зона деления; 3 - зона растяжения (увеличение 7 X 8 и 7 X 40)

В кончике корешка лука ядра окрашены ярче, чем цитоплазма, что указывает на большое содержание в них основных белков. Хромосомы окрашены так же или несколько слабее.

Из описаний вышеуказанных реакций на белки видно, что их можно открывать как обнаружением специфической для них пептидной связи (биуретовая реакция), так и обнаружением отдельных составляющих их аминокислот.

Параллельное проведение биуретовой, нингидриновой, миллоновой, ксантопротеиновой, нитропруссидной реакций, а также проведение реакции на основные белки позволяют дать некоторую качественную характеристику белков.

При отсутствии необходимости качественно дифференцировать белки наиболее удачной является реакция на белки по Мэзиа.

Следует учитывать чувствительность каждой реакции. Низкочувствительная биуретовая реакция пригодна лишь для обнаружения значительного количества белка. Реакции с берлинской лазурью или на белки по Мэзиа, напротив, являются высокочувствительными и могут применяться для выявления малого количества белка.

Хорошие индивидуалки могут украсить ваше одиночество своим наличием. Ищите их на этом интим сайте для молодых парней http://prostitutkiomskabar.com, если благоволите насладиться престижным трахом с симпатичными шлюхами. | Все брюнетки шлюхи сайта https://prostitutkinovokuznetskagoal.net/bryunetki/ были открыты, забивая персональные ведения о себе в предложениях. Смотрите их честные изображения, отдавая преимущество в пользу весьма прекрасной шлюхи.