Опыт 2.1. Определение числа бактерий в свежем и несвежем молоке

Цель эксперимента - определить, как суточное хранение молока при комнатной температуре влияет на его качество, и выяснить, почему оно скисает. Молоко - это почти полноценная пища для людей, а эксперименты покажут, что молоко служит превосходной культуральной средой и для целого ряда бактерий.

Материалы и оборудование

Четыре стерильные чашки Петри с питательным агаром

Микробиологическая петля

Бунзеновская горелка

Несмываемые чернила или восковой карандаш

Свежее пастеризованное молоко

Несвежее молоко (молоко, простоявшее 24 ч при комнатной температуре)

Термостат, настроенный на температуру 35°С

Методика

1. Простерилизуйте микробиологическую петлю, введя ее в пламя горелки (подержите ее там, пока она не покраснеет) (рис. 2.20, А).

Рис. 2.20. Стерилизация проволочной петли прокаливанием в пламени горелки и посев штрихом молочных бактерий на чашки Петри с питательным агаром. Наберите капельку молока в петлю. Приподнимите крышку чашки Петри ровно настолько, насколько необходимо, и нанесите штрихи, как изображено на рисунке, стараясь не поцарапать поверхность агара. Каждая линия обозначает одно движение проволочной петли. После каждых шести штрихов прокалите и охладите петлю

2. Дайте петле остыть и затем окуните ее в пробу свежего молока; молоко предварительно хорошо взболтайте.

3. Слегка приподнимите крышку стерильной чашки с агаром и осторожно распределите содержимое петли по поверхности агара, как показано на рис. 2.20, Б.

4. Закройте крышку и снова прокалите петлю в пламени горелки.

5. Пометьте чашку снизу несмываемыми чернилами (или восковым карандашом).

6. Повторите всю процедуру со второй чашкой и другой пробой свежего молока.

7. Простерилизуйте петлю снова и, дав ей остыть, окуните ее в пробу несвежего молока.

8. Распределите содержимое петли по поверхности третьей чашки и затем закройте крышку.

9. Пометьте чашку снизу несмываемыми чернилами.

10. Повторите всю процедуру с четвертой чашкой и второй пробой несвежего молока.

11. Поставьте ваши четыре чашки в термостат при 35°С на 3 сут. Прежде чем ставить чашки в термостат, переверните их вверх дном, чтобы капли конденсата не падали сверху на культуру. После инкубации склейте половинки каждой чашки липкой лентой, чтобы культура не пропала.

12. Опишите внешний вид колоний и сравните ваши результаты с описанием из разд. 2.7.1.

Примечания

1. Студенты могут заполнить чашки самостоятельно, если есть стерильные пробирки Мак-Картни с питательным агаром.

2. При посеве штрихом число бактерий в каждом следующем штрихе постоянно уменьшается. Этот метод удобнее применять, когда количество бактерий в пробе велико, как, например, в молоке. Его обычно используют для получения чистых колоний бактерий из смешанной культуры.

3. После инкубации чашки можно положить в холодильник и держать там, пока они не понадобятся. Охлаждение препятствует дальнейшему росту бактерий.

4. Когда чашки станут больше не нужны, их следует положить в пакет одноразового использования, проавтоклавировать 15 мин и только затем выбросить.

5. С молоком можно провести и другие опыты. Эксперимент, описанный выше, самый простой. Можно, например, оценить влияние охлаждения. Можно также исследовать влияние пастеризации на содержание бактерий в молоке, тем более если нетрудно получить сырое (непастеризованное) молоко (допустим, прямо с молочной фермы). Для пастеризации молоко разливают по стерильным пробиркам, затыкают пробирки ватными пробками, а затем прогревают в течение 35 мин при 63°С на водяной бане. Третий вариант опыта заключается в том, что берут несколько чашек и инкубируют их при 10°С, а не при 35°С. Такая низкая температура благоприятна для роста Streptococcus lactis и не способствует росту Lactobacillus.