Опыт 5.1. Определение биомолекул в чистом виде

Внимание! При всех описанных здесь анализах нагревание следует проводить на водяной бане при температуре кипения воды. Прямое нагревание пробирок на огне недопустимо.

Материалы и оборудование

Лакмусовая бумага

Пробирки

Штатив для пробирок

Бунзеновская горелка

Пипетки

Шпатель

Шприц (1 см³)

Раствор йода в йодистом калии

Реактив Бенедикта

Разбавленная серная кислота

Гидрокарбонат натрия (питьевая сода)

Судан III

Реактив Миллона

5%-ный раствор гидроксида калия

1%-ный раствор сульфата меди

Раствор дихлорфенолиндофенола (ДХФИФ)

1%-ный раствор крахмала (желательно из кукурузной муки)

1%-ный раствор глюкозы

2%-ный раствор сахарозы (следует использовать химически чистую сахарозу, не содержащую примеси какого-либо редуцирующего сахара)

Оливковое или кукурузное масло

Абсолютный спирт

Яичный альбумин

1%-ный раствор лактозы

1%-ный раствор фруктозы

Углеводы

Редуцирующие сахара. К редуцирующим сахарам относятся все моносахариды, например глюкоза и фруктоза, и некоторые дисахариды, например мальтоза. Используйте для анализа 0,1-1%-ные растворы Сахаров.

Реакция Бенедикта

Примечание. Смесь при нагревании обычно сильно "фыркает", так что нужно быть очень осторожным. Реакция полуколичественная, иначе говоря, она позволяет лишь грубо оценить количество редуцирующего сахара, присутствующего во взятой пробе. Окраска осадка переходит от зеленой к желтой, оранжевой и кирпично-красной с увеличением количества редуцирующего сахара. (Зеленый цвет есть результат смешения появившегося желтого осадка с синим раствором сульфата меди.)

Реакция Фелинга

Примечание. Реакция Фелинга не столь удобна, как реакция Бенедикта, потому что реактивы А и В приходится до анализа хранить раздельно. Чувствительность ее также ниже.

Нередуцирующие сахара. Наиболее распространенный из нередуцирующих Сахаров - это сахароза, относящаяся к дисахаридам. Если известно, что редуцирующие сахара в исследуемом растворе отсутствуют (т. е. если предыдущая реакция дала для этого раствора отрицательный результат), то появление кирпично-красного осадка в реакции, описанной ниже, свидетельствует о присутствии какого-то нередуцирующего сахара. Если же было показано, что в исследуемом растворе содержатся редуцирующие сахара, то в описанной ниже реакции будет получен более обильный осадок, нежели в предыдущей реакции при наличии в растворе также и какого-либо нередуцирующего сахара.

Нередуцирующие сахара

Крахмал. Растворим в воде очень слабо; образует в ней коллоидные суспензии. Анализ можно проводить как с суспензией, так и с сухим крахмалом.

Иодная реакция

Целлюлоза и лигнин. См. Приложение 2.4.2 (окрашивание).

Липиды

К липидам относятся масла (например, кукурузное и оливковое), жиры и воска.

Липиды

Белки

Для этих анализов очень подходит альбумин куриного яйца.

Белки

Витамин С (аскорбиновая кислота)

Данный метод можно при необходимости использовать для количественного определения. В этом случае указанные объемы следует отмерять очень точно. Подходящим источником витамина С может

служить свежий апельсиновый или лимонный сок в смеси с дистиллированной водой (1:1). Можно использовать также имеющиеся в продаже таблетки витамина С.

Витамин С (аскорбиновая кислота)

¹ (Встряхивание раствора может привести к окислению аскорбиновой кислоты кислородом воздуха. Можно проверить самому, как отразится на результатах опыта встряхивание и кипячение.)

5.20. Как можно определить концентрацию аскорбиновой кислоты в полученной пробе?

5.21. Вам даны три раствора сахара: в одном содержится глюкоза, в другом - смесь глюкозы и сахарозы, в третьем - сахароза.

а) Как вы определите, какой сахар содержится в каждом из этих растворов?

б) Кратко опишите дальнейшие процедуры, с помощью которых можно подтвердить правильность вашего ответа (допустим, что в вашем распоряжении имеется нужный прибор и что время позволяет провести такие определения).

5.22. Как можно приготовить 100 мл 10%-ного раствора глюкозы?

5.23. В вашем распоряжении имеются в качестве исходных растворов 10%-ный раствор глюкозы и 2%-ный раствор сахарозы. Как можно приготовить из них 100 мл смеси с конечной концентрацией 1% сахарозы и 1% глюкозы?