Гистохимические реакции на ферменты

Гистохимические реакции на фосфатазы

Один из методов обнаружения фосфатаз основан на выпадении осадка фосфорнокислой соли, которая образуется при взаимодействии ионов кальция или свинца с остатком фосфорной кислоты, освобождающейся под действием фермента.

При выявлении щелочной фосфатазы выпадает в осадок фосфат кальция, нерастворимый в щелочной (но растворимый в кислой) среде. При определении кислой фосфатазы создаются условия для образования фосфата свинца, нерастворимого в кислой среде.

Реакции по выявлению фосфатаз, как и других ферментов, лучше всего проводить на свежем, живом материале. При этом надо соблюдать ряд предосторожностей, во избежание большой потери ферментов, их инактивации и образования продуктов ферментативного расщепления.

В то же время, если нет возможности пользоваться свежим материалом или необходимо получение постоянных микротомных препаратов, фиксированный в 10%-ном формалине или 90%-ном спирте материал при соблюдении определенных правил может дать неплохие результаты.

Фиксацию в 10%-ном формалине следует производить в течение 24 ч при низкой температуре (4° С), фиксацию в 90%-ном спирте - в течение такого же времени при комнатной температуре (22° С). Проводку до парафина производить обычным способом, но по возможности сократить и ускорить эту процедуру. Заливку в парафин проводить как можно скорее (3 смены парафина по 20 мин. при 56° С).