Гистохимические реакции на оксидазы

Реакция на цитохромоксидазу

Реакция основана на том, что в присутствии цитохрома С цитохромоксидаза окисляет смесь диметилпарафенилендиамина и α-нафтола ("нади"-реактив) с образованием окрашенного соединения - индофенолового синего.

Эта реакция не является строго специфичной, гак как, она получается в присутствии лигнина и других соединений, а индофеноловый синий легко растворяется в липидах:

Имеются указания, что в различных тканях деятельность этого фермента протекает при различных pH. Для растительных тканей оптимальным предполагается pH до 5,8.

Реактивы

"Нади"-реактив.

Приготовление реактива. Приготовить 200 мл фосфатного буфера (стр. 118) pH=5,8, слив исходные растворы Na₂HPO₄•2H₂O и KH₂PO₄ в отношении 1:9. Приготовить 0,01 М раствор диметилпарафенилендиамина, растворив 0,136 г реактива в 100 мл буфера. Приготовить 0,01 М раствор α-нафтола, растворив 0,144 г реактива в 100 мл буфера. Перед употреблением раствор диметилпарафенилендиамина надо слить с раствором α-нафтола в отношении 1:1.

Проведение реакции

1. Поместить срез в каплю "нади"-реактива и накрыть покровным стеклом.

2. Наблюдать появление синего окрашивания.

Результаты реакции (табл. 27)

Таблица 27. Реакция на цитохромоксйдазу. Зерновка кукурузы. А - общий вид зерновки кукурузы в разрезе; Б - детали строения; 1 - зародышевый корешок; 2 - щиток; 3 - всасывающий эпителий; 4 - алейроновый слой и прилегающие клетки эндосперма; 5 - алейроновый слой в нижней части эндосперма; 6 - эндосперм около средней части щитка; 7 - точка роста почечки; 8 - проводящие пучки

В листе капусты реакция проявляется очень незначительно. В зерновке кукурузы толща эндосперма не окрашивается вовсе, алейроновый слой его дает довольно интенсивное окрашивание. Особенно заметно окрашиваются почечка и проводящие пути корешка и щитка.