Глава 8. Изменчивость и наследственность у риккетсий Бернета

Ряд наблюдений свидетельствует об изменении биологических свойств риккетсий Бернета в зависимости от условий внешней среды. Так, выделенный в Монпелье штамм вызывал на 20 - 30-й день после тестикулярного заражения гибель 40% морских свинок. После нескольких пассажей на морских свинках вирулентность штамма повысилась и он стал вызывать гибель всех животных на 5 - 10-й день после заражения с явлениями энцефалита и в ряде случаев кератита. Этот вариант риккетсий имел ту же антигенную структуру и морфологию, что и исходный штамм, однако утратил способность размножаться в куриных эмбрионах. Тот же штамм повысил вирулентность для морских свинок после пассажа через овцу. Так, например, кровь инфицированной овцы вызывала развитие смертельного заболевания у всех морских свинок (Carrere, Roux, 1954; Саггёге с соавторами, 1956; Roux, 1956).

Н. И. Амосенковой, А. Б. Дайтером, Л. Д. Васильевой, К. Н. Кленовым в 1955 - 1959 гг. в Ленинградской области и Ленинграде было выделено 12 штаммов риккетсий Бернета. Для испытания вирулентности этих штаммов авторы использовали культуры, прошедшие не более 5 пассажей в куриных эмбрионах при введении в полость желточного мешка разведений суспензии 10^-3-10^-5 в объеме 0,2 мл.

Brezina с сотрудниками (1963) в Чехословакии выделили от больных людей, зараженных животных и клещей группу штаммов риккетсий Бернета и провели сравнительное изучение их свойств.

Наблюдения советских и чехословацких исследователей свидетельствуют о значительном варьировании вирулентности различных штаммов риккетсий Бернета, причем 1 летальная доза для морских свинок варьирует от 10⁵ до 10¹² ID₅₀. Кроме того, Н. И. Амосенкова и Л. Д. Васильева (1961) отметили, что штамм Желтогорлая мышь - Луга вызывает у морских свинок образование комплементсвязывающих антител в титре 1:10-1:640 при введении культуры из желточных мешков куриных эмбрионов даже в разведении 10^-13-10^-14.

Таким образом, в естественных условиях удалось обнаружить штаммы риккетсий Бернета с различной вирулентностью, причем штаммы с низкой вирулентностью приближаются к вакцинным (например, Z - 57 и Ленинград - 2). Наиболее вирулентными оказались штаммы, выделенные от членистоногих и диких животных. Штаммы риккетсий Бернета, выделенные от больных людей и сельскохозяйственных животных, были маловирулейтными.

В лабораторных условиях неоднократно отмечалось снижение вирулентности риккетсий Бернета. Так, еще в 1941 г. Сох отметил снижение вирулентности для морских свинок австралийского и американского штаммов риккетсий Бернета при длительном выращивании в желточных оболочках развивающихся куриных эмбрионов.

В 1957 г. В. А. Гениг под руководством П. Ф. Здродовского при обследовании яичной культуры 44-го пассажа штамма Брита, полученной в 1954 г., выявила малопатогенный вариант риккетсий Бернета (П. Ф. Здродовский, 1959; В. А. Гениг, 1960, 1963). Проведенное В. А. Гениг (1960, 1963) изучение свойств данного варианта, обозначенного первоначально как вариант М, а затем описанного как 44-М и М-44, показало, что он, не отличаясь по морфологии и накоплению в желточных оболочках куриных эмбрионов от вирулентного штамма Брита, обладал гораздо меньшей патогенностью для морских свинок при внутрибрюшинном, подкожном, тестикулярном, внутрикожном и накожном способах заражения. Так, при подкожном введении варианта М-44 клинические симптомы инфекции у морских свинок отмечались только в случае инъекции в 10⁵-10⁶ раз больших доз, чем штамма Брита, причем заболевание протекало гораздо доброкачественнее. Местная реакция у морских свинок развивалась только после введения больших количеств варианта М-44. Накопление риккетсий варианта М-44 в инфильтрате и в регионарных лимфатических узлах было гораздо меньше, чем у животных, инфицированных штаммом Брита.

Помимо морских свинок, вариант М-44 оказался менее патогенным, чем штамм Брита, также для белых мышей и кроликов.

Наряду с отчетливым снижением патогенности для лабораторных животных вариант М-44, даже при однократной инъекции высоких разведений яичной культуры (до 10^-8), обеспечивал появление в сыворотке морских свинок специфических комплементсвязывающих антител, хотя и в более низких титрах, чем вирулентный штамм Брита. Уже через 3 - 7 дней после инъекции варианта М-44 морские свинки оказывались резистентными к 10³ инфицирующих доз вирулентной культуры риккетсий Бернета. На 45 - 50-й день морские свинки были невосприимчивы к 10⁵ инфицирующих доз риккетсий Бернета, причем иммунитет сохранялся не менее года.

Таблица 13. Восприимчивость морских свинок к эталонному штамму Грита риккетсий Бернета и его варианту М-44

Примечание. Титр комплементсвязывающих антител к антигену II фазы определен на 25-й день, после заражения.

Наши исследования (А. И. Полозов и В. Н. Паутов, 1961) подтвердили наблюдения П. Ф. Здродовского и В. А. Гениг о стойком снижении патогенности варианта М-44. Так, у морских свинок после внутрибрюшинного, внутримышечного и внутрикожного заражения лихорадочная реакция отмечалась лишь в случае инъекции больших доз риккетсий, причем местная реакция при внутрикожном заражении была менее выраженной. Титры комплементсвязывающих антител (к антигену II фазы) в сыворотке морских свинок после введения даже больших доз варианта М-44 (порядка 10⁶-10⁷ ID₅₀) не превышали 1:320-1:640, тогда как у животных, зараженных оригинальным штаммом Трита, титр антител достигал 1:1280-1:2560 и выше (табл. 13).

Таким образом, изучение свойств варианта М-44 показало его низкую вирулентность для морских свинок и достаточно выраженную иммуногенность, близкую к исходному штамму Трита (табл. 14).

В соответствии с нашими наблюдениями энтеральное введение морским свинкам варианта М-44 не вызывает клинически выраженного заболевания, но обеспечивает появление в сыворотке комплементсвязывающих антител и приобретение животными резистентности к вирулентной культуре риккетсий Бернета. Доза риккетсий, обеспечивающая иммунизацию 50% морских свинок при энтеральном введении варианта М-44, оказалась равной примерно 60 ID₅₀ для белых крыс (А. А. Воробьев и В. Н. Паутов, 1964).

Исследования А. Т. Кравченко с соавторами (1963) также свидетельствуют о значительном снижении патогенности указанного варианта риккетсий Бернета, обозначенного авторами как Грита - Д. Так, у морских свинок лихорадочная реакция до 39,6 - 39,8° в течение 2 - 3 дней наблюдалась только после инъекции больших доз риккетсий.

Таблица 14. Сравнительная оценка вирулентности штамма Грита риккетсий Бернета и его варианта М-44 для морских свинок

Условные обозначения: FD₅₀, ID₅₀ и DD₅₀ - содержание в 1 мл культуры доз, обеспечивающх соответственно лихорадочное заболевание, образование антител и кожную реакцию у 50% морских свинок.

В связи с отчетливым снижением патогенности у варианта М-44 риккетсий Бернета большое значение приобрело изучение стабильности его свойств. Оказалось, что при последовательных пассажах на морских свинках происходит истощение культуры, ввиду чего не удается провести более 7 - 8 перевивок. Снижение естественной резистентности морских свинок с помощью кортизона не отразилось на доброкачественности течения экспериментального риккетсиоза, вызванного вариантом М-44 (В. А. Гениг, 1963). Вирулентность варианта М-44 не изменилась при длительном выращивании риккетсий в среде с переживающими тканями (Н. Н. Рыбкина, 1960), после 5 пассажей через яичко морских свинок (А. Т. Кравченко с соавторами, 1963) и при пассажах на иксодовых клещах (А. И. Полозов, В. Н. Паутов, 1961; А. Т. Кравченко с соавторами, 1963).

По данным В. А. Гениг (1963), в лиофильно высушенной яичной культуре свойства варианта М-44 не изменяются по крайней мере в течение 3 лет (срок наблюдения).

Учитывая наши результаты 10 - летнего наблюдения за сохранением лиофильно высушенных яичных культур штамма Грита (В. Н. Паутов, А. И. Полозов, 1961), можно полагать, что высушенные культуры варианта М-44 останутся стабильными в течение весьма длительного срока.

Полученные данные, свидетельствующие о стойком снижении патогенности варианта М-44 риккетсий Бернета для лабораторных животных, позволили испытать этот вариант в качестве живой вакцины для иммунизации людей. Впервые вакцинация людей вариантом М-44 была осуществлена в 1961 г. П. Ф. Здродовским й В. А. Гениг (П. Ф. Здродовский, В. А. Гениг, 1962; В. А. Гениг, 1963).

По данным В. А. Гениг (1963), после подкожной инъекции 10⁵ инфицирующих доз (для куриных эмбрионов) варианта М-44 из 28 вакцинированных человек у 17 общей реакции не наблюдалось, у 9 отмечалось лишь кратковременное повышение температуры до 37,2 - 37,5° и только у 2 человек температура достигала 37,6 - 38,5°. Местная реакция наблюдалась у 8 человек, причем у семи отмечался инфильтрат менее 3 см, а у одного - инфильтрат до 6 см. В случае инъекции варианта М-44 в количестве 10³ - 10⁴ инфицирующих доз (для куриных эмбрионов) из 20 иммунизированных человек слабая общая реакция (повышение температуры до 37,2 - 37,5°) наблюдалась у 5 человек, а слабая местная реакция - у четырех. Общая реакция отмечалась на 2 - 3-и сутки и, кроме повышения температуры, характеризовалась кратковременным ознобом, иногда недомоганием и головной болью. Сильных ранних реакций, а также поздних отдаленных реакций не наблюдалось. Местная реакция развивалась на 3 - 4-е сутки и продолжалась в среднем в течение 48 часов. В период с 6-го по 17-й день после введения варианта М-44 в крови 16 обследованных человек риккетсии не были обнаружены. В крови всех иммунизированных спустя 21 - 30 дней были выявлены специфические комплементсвязывающие антитела, титр которых достиг максимума на 60 - 75-й день (средний титр 1:84). Спустя 1 год антитела были обнаружены в сыворотке 7 из 8 обследованных.

После ревакцинации вариантом М-44 у лиц, имевших в сыворотке специфические антитела и работавших в очаге Ку-лихорадки, наблюдалась местная реакция с максимумом на 3 - 4-й день. У лиц, которые работали в очаге Ку-лихорадки, но в сыворотке которых антитела отсутствовали, на 2-е сутки было зарегистрировано однодневное повышение температуры до 37,5 - 38,8°, которое сопровождалось местной реакцией, головной болью и кратковременным ознобом.

В случае ревакцинации вариантом М-44 сотрудников риккетсиозной лаборатории через 4 года после иммунизации убитой корпускулярной вакциной при инъекции около 103 инфицирующих доз (для куриных эмбрионов) лихорадочная реакция в большинстве случаев отсутствовала, однако в течение 2 дней отмечались озноб, разбитость и головная боль. После инъекции меньших доз риккетсий общая реакция отсутствовала, однако на 5 - 7-й день наблюдалась местная реакция в виде слабой гиперемии и припухлости. По мнению В. А. Гениг, эти реакции скорее всего обусловлены специфической сенсибилизацией людей при длительном соприкосновении с возбудителем Кулихорадки.

После апробации варианта М-44 в июле 1961 г. Комитет вакцин и сывороток Министерства здравоохранения СССР рекомендовал указанный вариант риккетсий Бернета в качестве живой вакцины против Ку-лихорадки.

В соответствии со сводными данными П. Ф. Здродовского (1963) по иммунизации 1040 человек при подкожной инъекции 0,5 мл разведения 10^-4 яичной культуры риккетсий с активностью 10⁸ - 10⁹ инфицирующих доз (для куриных эмбрионов) реакция наблюдалась у 4,8%. Спустя месяц комплементсвязывающие антитела были обнаружены в сыворотке 93% иммунизированных, а спустя 5 - 6 месяцев - у 78% обследованных людей.

Таким образом, полученные к настоящему времени данные свидетельствуют о возможности стойкого, резко выраженного и наследственно закрепленного снижения вирулентности риккетсий Бернета при длительном культивировании в развивающихся куриных эмбрионах.

Таблица 15. Концентрация и вирулентность риккетсий Бернета в лиофильно высушенных препаратах, хранящихся при 4° под вакуумом

С целью изучения влияния хранения на свойства риккетсий Бернета мы оценивали вирулентность штамма Грита в культурах, длительно находившихся в различных условиях (А. И. Полозов и В. Н. Паутов, 1961; В. Н. Паутов и А. И. Полозов, 1961). Вирулентность контролировали на морских свинках по двум показателям: по способности вызывать, клинически выраженную форму Ку-лихорадки при введении в брюшную полость различных доз риккетсий (FD50) и по результатам реакции связывания комплемента и наличию иммунитета к повторному заражению вирулентной культурой (серологическо-иммунологический показатель ID₅₀). Было изучено 16 серий яичных культур риккетсий Бернета, высушенных под вакуумом из замороженного состояния и хранившихся под вакуумом при 4°. Оказалось, что свежеприготовленные культуры и препараты, хранившиеся в течение года, как правило, не вызывали у морских свинок бессимптомных форм инфекции даже при введении минимальных доз риккетсий. В результате значения, определенные на основании клинических проявлений Ку-лихорадки (FD₅₀) и серологической и иммунологической реакций животного (ID₅₀), полностью совпадали, т. е. активность культур, выраженная в FD₅₀, FD₅₀ равнялась показателям, выраженным в ID₅₀, а

Однако, уже после трехлетнего хранения введение небольших доз препаратов не вызывало у морских свинок отчетливых клинических симптомов заболевания, но обеспечивало образование комплементсвязывающих антител (к антигену II фазы риккетсий) и приобретение животными иммунитета к 10⁵-10⁶ ED₅₀ вирулентной культуры риккетсий Бернета. Спустя 4 - 10 лет хранения при 4° во всех сериях препаратов было обнаружено четко выраженное снижение вирулентности риккетсий. В итоге значения lg ED₅₀, рассчитанные на основании серологическо - иммунологических показателей у животных (ID₅₀), закономерно оказывались выше значения lg ED₅₀, определенных по клиническим проявлениям заболевания (FD₅₀). В качестве примера в табл. 15 приведены результаты одного из опытов по изучению концентрации и вирулентности риккетсий Бернета в сухих культурах, находившихся под вакуумом при 4°.

При хранении сухих культур риккетсий Бернета без вакуума снижение вирулентности выражается более отчетливо (табл. 16). Так, после 4 - 5-летнего хранения препаратов различие в значениях ED₅₀, рассчитанных по серологическо - иммунологическому показателю (ID₅₀) и по клиническим проявлениям заболевания (FD₅₀), превышало 1000 - 10 000 раз, ввиду чего препараты не вызывали у морских свинок клинических симптомов риккетсиоза при внутрибрюшинном введении даже 10³-10⁴ доз, обусловливающих образование антител и приобретение морскими свинками иммунитета к вирулентной культуре риккетсий Бернета.

Таблица 16. Активность для морских свинок сухой культуры риккетсий Бернета, хранившейся при 4° без вакуума

Для изучения характера изменения вирулентности риккетсий Бернета при длительном хранении были проведены пассажи культур на куриных эмбрионах, зараженных дозой, не вызывающей клинических симптомов инфекции у морских свинок. Оказалось, что после 1 - 2 пассажей на куриных эмбрионах риккетсии восстанавливали высокую вирулентность и вновь вызывали у морских свинок, как правило, заболевание, протекающее с отчетливой клинической картиной.

Аналогичные изменения свойств риккетсий Бернета были обнаружены после хранения в течение 2 - 3 лет при 4° невскрытых инфицированных яиц, суспензии из яиц, а также органов больных морских свинок в глицерине. Однако при хранении сухой яичной культуры без вакуума при 20° не отмечалось различий в значениях ED₅₀, установленных по клинической картине заболевания (FD₅₀) и по серологическо - иммунологической реакции морских свинок (ID₅₀).

Н. Н. Ураков (1962) отметил снижение вирулентности риккетсий Бернета при облучении культуры вирулентного штамма Брита β- лучами в сочетании с 27 субпассажами на куриных эмбрионах, однако это свойство оказалось нестабильным.

Своеобразной формой изменчивости риккетсий Бернета является так называемая фазовая вариация. Впервые с феноменом фазовой вариации исследователи столкнулись вскоре после начала сравнительного изучения различных штаммов риккетсий Бернета. Еще в 1946 г. Topping с соавторами, Robbins с соавторами, а в 1949 г. E. и A. Rodaniche пришли к заключению о более высокой антигенной активности в реакции связывания комплемента итальянских и австралийских штаммов риккетсий Бернета, чем американских штаммов. Так, в сыворотке инфицированных морских свинок и переболевших людей комплементсвязывающие антитела в присутствии антигена из итальянского штамма Henzerling удавалось обнаружить уже в ранние сроки, тогда как в присутствии антигена из американского штамма Dyer антитела у морских свинок выявлялись лишь на 40 - 70-й день, а в сыворотке людей антитела вообще не обнаруживались. На основании такого рода наблюдений было высказано предположение о наличии у риккетсий Бернета двух отличающихся антигенов. Штаммы риккетсий, антигены из которых хорошо реагировали в реакции связывания комплемента, были объединены в группу высокоактивных (например, штамм Henzerling), а другие - в группу малоактивных (например, штамм Dyer). Однако исследования Wolfe и Kornfeld (1949) не выявили антигенных различий между американским штаммом Nine Mile и итальянским штаммом Henzerling. Более того, по данным Strauss и Sulkin (1949), американские штаммы Nine Mile и Dyer существенно отличаются друг от друга по активности в реакции связывания комплемента, причем штамм Nine Mile близок к итальянским штаммам, от которых значительно отличается штамм Dyer. Между тем штамм Dyer был выделен от человека, заразившегося в лабораторных условиях именно при работе со штаммом Nine Mile. Таким образом, оставалось предположить, что однократный пассаж штамма Nine Mile через человека значительно изменил антигенную структуру риккетсий.

Различия в активности в реакции связывания комплемента антигенов из различных штаммов риккетсий Бернета были обнаружены и другими исследователями (Herzberg и Urbach, 1951; Berge и Lennette, 1953; Snyder с соавторами, 1947; Smadel с соавторами, 1948, и др.).

Указанные наблюдения позволили Stoker (1950, 1953, 1954) предполжить, что различия антигенной активности штаммов риккетсий Бернета обусловлены не природными особенностями самих штаммов, а свойствами культур риккетсий, использованных для изготовления антигенов. Эта гипотеза была успешно подтверждена Stoker в серии исследований. Так, например, оказалось, что антигены английских штаммов Christie и М-1, приготовленные из культур риккетсий, прошедших небольшое количество пассажей на куриных эмбрионах, не обнаруживают комплементсвязывающие антитела в сыворотках раннего периода реконвалесценции и выявляют их в низком титре в сыворотках позднего периода реконвалесценции. Аналогичные антигены из культур риккетсий, прошедших большое количество пассажей на куриных эмбрионах, выявляют в высоком титре комплементсвязывающие антитела в сыворотках как позднего, так и раннего периода реконвалесценции. Таким образом, антигены из культур первых яичных пассажей оказались подобны антигенам из штаммов "малоактивной группы", тогда как антигены тех же штаммов, но проведенных многократно через куриные эмбрионы оказались аналогичными антигенам "высокоактивной группы".

Выявленное Stoker изменение антигенной активности риккетсий Бернета при культивировании в куриных эмбрионах впоследствии было обнаружено и у других штаммов. Так, Stoker и Fiset (1956) отметили данный феномен у американского штамма Nine Mile, Moreli и Gerbec (1956, 1959) - у нескольких югославских штаммов, в частности у штаммов Pirot и В. В., а также у американского штамма Dyer, Brezina (1958) - у чехословацких штаммов Strobová, Florián, Ixodes ricinus и L35, FI. И. Федорова и Р. Г. Дюйсалиева (1962) - у отечественного штамма Шоршер, Н. И. Амосенкова и Л. Д. Васильева (1961) - у отечественных штаммов Термез, Кучмай и Желтогорлая мышь - Луга и у итало-греческого штамма Грита, А. И. Яковлев и А. И. Полозов (1962) - у румынского штамма Констанца и итало-греческого штамма Грита, Anacker с соавторами (1962) - у американского штамма Ohio, Mikolajczyk (1963) - у штамма Henzerling, африканского штамма Bangui и польского штамма 755.

По предложению Stoker и Fiset (1956), изменение антигенной активности риккетсий Бернета в реакции связывания комплемента было названо фазовой вариацией. Культуры риккетсий, антиген из которых не выявлял антитела в антисыворотках раннего периода реконвалесценции, но обнаруживал их в более поздних сыворотках, получили название I фазы, а культуры риккетсий, антиген из которых выявлял антитела в сыворотках как позднего, так и раннего периодов реконвалесценции, были названы II фазой. А так как переход риккетсий из I фазы во II фазу происходит постепенно, то для культур риккетсий, уже обладающих свойствами II фазы, но еще не стабилизировавшихся в этом состоянии, было рекомендовано название "переходная фаза" (А. И. Яковлев и А. И. Полозов, 1962).

В настоящее время нет единой системы обозначения фаз риккетсий Бернета и соответствующих антигенов. Bobb и Downs (1962) рекомендуют обозначать фазы риккетсий арабскими цифрами, а антигены - римскими цифрами, однако эта система не является общепринятой.

В естественных условиях (в иксодовых клещах, селезенке овец, молоке коров и др.), а также в организме экспериментально инфицированных животных (морские свинки, белые мыши, овцы, хомячки и др.) риккетсии Бернета находятся в I фазе (Stoker и Fiset, 1956; Н. И. Амосенкова и Л. Д. Васильева, 1961; А. И. Яковлев и А. И. Полозов, 1962; Brezina и Urvolgyi, 1961, и др.). Риккетсии переходят из I фазы во II фазу, как впервые было отмечено Stoker (1950, 1953), при пассажах на куриных эмбрионах, однако фазовое состояние у отдельных штаммов изменяется с различной быстротой. Так, штамм Christie стабилизировался во II фазе к 9-му пассажу (Stoker, 1953), штамм Nine Mile - после 8 пассажей (Stoker и Fiset, 1956), штаммы L35, Strobova, Florian и Ixodes ricinus - после 10 - 13 пассажей (Brezina, 1958, 1959) штамм Констанца - к 12-му пассажу (А. И. Яковлев и А. И. Полозов, 1962), штаммы Кучмай, Термез, Трита и Желтогорлая мышь - Луга - после 10 - 15 пассажей (Н. И. Амосенкова и Л. Д. Васильева, 1961), штаммы Schwaben I и II и Heidelberg - после 14 - 16 пассажей (Herzberg и Urbach, 1951). Однако в опытах Berge (цит. по Fiset, 1959) один из штаммов остался в I фазе после 68 пассажей в куриных эмбрионах. В исследованиях Anacker с соавторами (1962) штамм Ohio после 16 пассажей на куриных эмбрионах находился в I фазе. По данным Ormsbee с соавторами (1964), штамм Ohio - 314 содержал большое количество риккетсий I фазы даже после 22 пассажей на куриных эбрионах. По мнению Stoker и Fiset (1956) и Ormsbee с соавторами (1964), на быстроте перехода риккетсий Бернета из I фазы во II фазу сказываются не только особенности штаммов, но и методика пассажей, в частности степень разведения культуры риккетсий и время вскрытия инфицированных куриных эмбрионов.

В опытах Stoker и Fiset (1956) обратный переход риккетсий из II фазы в I фазу (штамм Nine Mile и Christie) был зарегистрирован после 2 - 3 пассажей на морских свинках, при 15 - дневном пребывании в организме морских свинок или 30-дневном - в белых мышах. Переход II фазы штамма Констанца в I фазу в опытах А. И. Яковлева и А. И. Полозова (1962) начался после I пассажа на морских свинках и завершился после 4 пассажей; штамм Грита, находившийся в переходной фазе, приобрел качества I фазы после 15 - дневного выживания в организме овцы. По данным Brezina и Urvolgyi (1961), штаммы Florian, Ixodes ricinus и L35 перешли из II фазы в I фазу после 3 - 4 пассажей на белых мышах. Переход из II фазы в I фазу при пассажах на морских свинках был отмечен также у штаммов Pirot (Morelj и Gerbec, 1956, 1959), Грита, Термез, Кучмай и Желтогорлая мышь - Луга (Н. И. Амосенкова и Л. Д. Васильева, У v? 1961). Brezina и Rehacek (1961) наблюдали превращение II фазы штамма Henzerling в I фазу при выращивании в клещах D. marginatus. Однако в исследованиях А. И. Яковлева и А. И. Полозова (1962) после пребывания в течение 30 дней в клещах R. sanguineus антигенная структура II фазы штамма Констанца не изменилась и риккетсии не приобрели свойств I фазы. Наконец, как свидетельствуют наблюдения Carvalho de Souza (1959), II фаза штамма Nine Mile превращается в I фазу при выращивании в первично трипсинизированных клетках куриных и мышиных эмбрионов в присутствии специфической антисыворотки к антигену II фазы риккетсий. Однако в исследованиях О. С. Гудимы (1960) риккетсии, находившиеся во II фазе (штамм Грита), приобрели свойства I фазы при выращивании в культуре клеток HeLa без специфической антисыворотки.

Превращение риккетсий Бернета из I фазы во II фазу при культивировании в куриных эмбрионах Fiset (1955, 1959), а также и некоторые другие исследователи (Carvalho de Souza, 1959; А. И. Яковлев и А. И. Полозов, 1962) связывают с неспособностью эмбрионов вырабатывать специфические антитела. Напротив, в организме животных в результате воздействия антител риккетсии Бернета приобретают структуру I фазы (Stoker и Fiset, 1956). В пользу такого предположения свидетельствуют данные Fiset (1955, 1959) о том, что штамм Nine Mile при выращивании в куриных эмбрионах в присутствии антисыворотки к антигену II фазы оставался в I фазе. По мнению А. И. Яковлева и А. И. Полозова (1962), отмеченное в их опытах сохранение риккетсии в виде II фазы при выращивании в клещах также может быть объяснено неспособностью членистоногих образовывать антитела. В противоположность этим исследованиям Brezina и Rehacek (1961) отметили превращение II фазы в I фазу при выращивании в клещах. Данное наблюдение позволило авторам предположить, что антитела не являются единственным фактором, ответственным за возникновение и сохранение I фазы риккетсий Бернета. Об этом же свидетельствуют и данные О. С. Гудимы, наблюдавшего переход риккетсий из II фазы в I фазу в культуре ткани при отсутствии в ней специфических антител.

Изучение динамики накопления комплементевязывающих антител в сыворотке морских свинок показало, что антитела ко II фазе риккетсий появляются в первые дни после перенесения Ку-лихорадки, достигают максимума к 20 - 30-му дню, а затем длительно обнаруживаются в снижающемся титре. Антитела к I фазе риккетсий образуются лишь к 30 - 40-му дню и достигают максимума к 45 - 95-му дню (Stoker и Fiset, 1956; А. И. Яковлев и А. И. Полозов, 1962). По данным Sidwell и Gebhardt (1962), в сыворотке диких грызунов в первые 3 недели после заражения в высоком титре содержатся антитела к антигену II фазы, на 4 - 7-й неделе - в относительно невысоком титре к I фазе и в высоком титре ко II фазе. Спустя 10 - 18 недель в относительно невысоком титре обнаруживаются антитела к I и II фазам, а через 25 - 36 недель - только ко II фазе.

В соответствии с наблюдениями Stoker (1953) антигены из I фазы штамма Christie и из II фазы штамма Henzerling не отличаются по активности в реакции агглютинации. А. И. Яковлев и А. И. Полозов (1962) также не обнаружили различии в агглютинабельности антигенов из I и II фаз риккетсий (штаммы Грита и Констанца). С другой стороны, рядом исследователей были отмечены определенные различия в агглютинабельности отдельных штаммов, однако эти свойства штаммов не оценивались с учетом фазового состояния риккетсий (Topping с соавторами, 1946; Herzberg и Urbach, 1951; Herzberg и May, 1955, и др.). Наконец, Brezina и Urvolgyi (1961) показали, что феномен фазовой изменчивости наблюдается и в реакции агглютинации штаммов Henzerling, Florian, Ixodes ricinus и L35. Штамм Nine Mile оказался совершенно неагглютинабельным, причем это качество не зависело от фазового состояния. Данное обстоятельство позволило Brezina и Urvolgyi предположить влияние на агглютинабельность штаммов риккетсий Бернета как фазового состояни